生物膜检测国际标准 ASTM 与 ISO 相关规范汇总

问：生物膜检测国际标准ASTM与ISO及国内相关规范汇总——核心标准如何保障检测准确性？国内规范与国际标准存在哪些适配要点？

答：

一、标准名称

本部分汇总生物膜检测领域国内核心标准，覆盖医疗器械、食品接触材料、水处理等关键应用场景，所选标准均为现行有效且行业认可度高的规范文件。

1. GB/T 38496-2020《医疗器械生物膜形成试验方法》

2. GB/T 42274-2022《食品接触表面生物膜检测方法》

3. GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》（含生物膜相关检测内容）

4. HG/T 5959-2021《工业循环冷却水中生物膜量的测定 重量法和荧光法》

二、标准内容

一. GB/T 38496-2020《医疗器械生物膜形成试验方法》

该标准规定医疗器械表面生物膜形成的实验室模拟试验方法，适用于医疗器械研发、生产及质量控制阶段的生物膜形成能力评估。试验菌株需选用金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、铜绿假单胞菌（ATCC 27853）等6种标准菌株，菌株活化需采用胰蛋白胨大豆琼脂培养基，在37℃±1℃环境下培养18h-24h。试验样品需经无菌处理后，置于含菌液的培养体系中，在37℃±1℃、转速50r/min±5r/min的摇床中培养48h±2h。生物膜定量采用结晶紫染色法，在595nm波长下测定吸光度值，空白对照组吸光度值需≤0.05，试验组平行样相对偏差需≤15%。

二. GB/T 42274-2022《食品接触表面生物膜检测方法》

标准适用于食品生产、加工、储存等环节中不锈钢、塑料、陶瓷等常见食品接触表面生物膜的检测。采样采用无菌棉签擦拭法，擦拭面积为10cm×10cm，擦拭过程需沿同一方向匀速进行，每个采样点需更换新棉签。样品前处理采用超声洗脱法，洗脱液为无菌生理盐水，超声功率40kHz±5kHz，洗脱时间10min±1min。定性检测采用平板计数法，选用营养琼脂培养基，36℃±1℃培养48h±2h，菌落数≥10²CFU/cm²判定为生物膜阳性。定量检测采用ATP生物发光法，检测下限为1.0×10⁻¹⁵mol/cm²，检测结果相对标准偏差需≤20%。

三. GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》

标准中生物膜检测部分针对饮用水输配管道内壁生物膜，规定采样、检测及结果评价方法。采样采用专用管道生物膜采样器，采样长度为50cm，采样时需先排出管道内滞留水3倍管径体积。检测采用异养菌平板计数法，培养基为R2A琼脂，培养温度28℃±1℃，培养时间7d±1d。同时规定采用荧光原位杂交法进行菌种鉴定，探针特异性需≥95%，杂交温度需根据探针类型控制在42℃-55℃。结果评价以异养菌密度≤10³CFU/cm²为合格，超过该值需进行管道清洗消毒。

四. HG/T 5959-2021《工业循环冷却水中生物膜量的测定 重量法和荧光法》

标准规定工业循环冷却水中生物膜量的两种测定方法，重量法适用于生物膜量较高的场景，荧光法适用于低生物膜量的精准测定。重量法采样采用挂片法，挂片材质为304不锈钢，尺寸50mm×25mm×2mm，挂片周期7d±1d。样品处理需经除盐、干燥步骤，干燥温度105℃±2℃，干燥时间2h±0.5h，恒重后称量，生物膜量计算结果保留两位小数。荧光法采用荧光染料SYBR Green I染色，激发波长488nm，发射波长520nm，标准曲线线性相关系数需≥0.99，检测范围为0.01μg/cm²-10μg/cm²，相对误差≤10%。

三、检测的重要性与核心方法

生物膜检测在医疗、食品、水处理等领域具有不可替代的作用，医疗领域可预防医疗器械相关感染，食品领域能避免生物膜导致的食品污染，水处理领域可监控管道腐蚀及水质恶化。其核心方法分为培养法与非培养法，培养法如平板计数法，优势为结果直观、成本低，缺点是检测周期长（48h-7d）；非培养法包括荧光染色法、ATP生物发光法、分子生物学方法等，荧光染色法可实现生物膜可视化，检测时间≤2h；ATP生物发光法快速便捷，15min内可完成检测，适用于现场快速筛查；分子生物学方法如荧光原位杂交法，可精准鉴定生物膜菌种，分辨率达种属水平。检测过程需严格控制采样代表性、培养基质量及仪器精度，确保结果准确可靠，为后续防控措施制定提供科学依据。