2025 速冻食品检测标准更新：李斯特菌检测新规

问：2025年速冻食品检测标准在李斯特菌检测方面有哪些更新？新的检测标准对速冻食品行业有何影响？

答：

一、标准名称

1. GB 4789.30 - 2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》

2. GB 29921 - 2021《食品安全国家标准 预包装食品中致病菌限量》（涉及速冻食品中李斯特菌限量相关部分）

3. SN/T 5367.1—2022《出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌环介导恒温核酸扩增（LAMP）筛选检测方法》

4. SN/T 5364.6—2021《出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌的微滴式数字PCR检测方法》

5. GB/T 22429 - 2008《食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测方法 酶联免疫法》

二、标准内容

一. GB 4789.30 - 2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》：该标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法。在培养基和试剂方面，参照ISO标准，将定性检验和MPN法中的选择性增菌液体培养基由LB1和LB2修改为“Fraser增菌肉汤(FB1、FB2)” ；选择分离显色培养基“李斯特氏菌显色平板“修改为“OA李斯特氏菌显色平板”，并在附录A中增加了OA李斯特氏菌显色培养基配方。在检验程序上，对各环节操作进行了细化和完善，如在样品制备环节，针对固体、半固体及液态样品采用不同处理方式分别描述；在分离环节，增加了混匀的具体要求及PALCAM琼脂平板上菌落大小的描述，还明确了OA李斯特氏菌显色平板上菌落特征及其他亚菌种形态说明；在鉴定环节，把纯培养过程单列，使后续生化实验菌落来源更清晰，同时对鉴定实验步骤文字描述进行修改，使其更具体清晰。在平板计数规则上，将“所有平板菌落数合计在15CFU ～ 150CFU之间的平板，计数典型菌落数”修改为“所有平板典型和可疑菌落数合计在15CFU ～ 150CFU之间的平板，计数典型和可疑菌落数”，以提高结果稳定性。在样品接种环节，对于李斯特菌含量高的样品，采用每个稀释度分别吸取0.1mL样品匀液接种1个OA李斯特氏菌显色培养基平板的方式，减少了显色培养基用量，同时保留“0.3mL、0.3mL、0.4mL涂布法”以满足检出限更低需求和方法延续性，并新增从样品稀释至样品接种完毕不得超过45min的要求。

二. GB 29921 - 2021《食品安全国家标准 预包装食品中致病菌限量》：规定了预包装食品中单核细胞增生李斯特氏菌等致病菌的限量要求。对于速冻食品中的即食生制动物性水产制品等产品类别，明确了单核细胞增生李斯特氏菌的限量指标，如部分产品要求检出限小于等于100CFU/g ，为速冻食品生产企业及检测机构提供了明确的限量判定依据。

三. SN/T 5367.1—2022《出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌环介导恒温核酸扩增（LAMP）筛选检测方法》：运用环介导恒温核酸扩增（LAMP）技术进行单核细胞增生李斯特氏菌的筛选检测。其原理是根据单核细胞增生李斯特氏菌属特有靶序列上的6个独立区域，采用6条特异引物通过稳定的Bst DNA聚合酶来驱动扩增反应，在60℃左右完成恒温扩增。在环介导恒温核酸扩增反应中，焦磷酸盐(PPi)通过ATP - 硫酸化酶被转化成三磷酸腺苷(ATP)，荧光素酶利用ATP发光，从而实现实时检测，该方法可用于出口食品中李斯特菌的快速筛选。

四. SN/T 5364.6—2021《出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌的微滴式数字PCR检测方法》：针对单核细胞增生李斯特氏菌溶血素(hly)基因片段设计引物、探针，将一定浓度的引物、探针与模板DNA及数字PCR反应预混液混合配成PCR反应体系。将该数字PCR体系分布到10000 - 20000个微滴中，使大部分微滴中模板DNA分子的数量为1或0，然后进行PCR扩增。hly基因探针5’端标记FAM荧光基团，利用数字PCR系统的检测通道，对每个微滴的荧光信号进行采集分析。含有模板DNA的微滴出现荧光信号的增强，形成阳性微滴簇，根据阳性微滴的有无判定样品中是否含有单核细胞增生李斯特氏菌，用于出口食品中该菌的精准检测。

五. GB/T 22429 - 2008《食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测方法 酶联免疫法》：将做增菌处理后的增菌液经加热处理后移入包被特异性抗体(一抗)的固定容器中，使目标菌与一抗结合，洗去未结合的其他成分后加入特异性酶标抗体(二抗)，再次洗去未结合的其他成分，加入特定底物与之反应后可以生成荧光化合物或有色化合物，通过检测荧光强度或吸光度，与参照值比较即可得到检验结果，可快速检测食品中的李斯特菌。

三、检测重要性、方法等

李斯特菌是一种重要的食源性致病菌，尤其在速冻食品这类低温储存食品中具有潜在风险。其可通过食物链传播给人类，对于新生儿、孕妇、老年人以及免疫系统较弱的人群危害极大，可能引发脑膜炎、败血症等严重疾病。对速冻食品进行李斯特菌检测，能够及时发现食品污染情况，预防食源性疾病发生，保障消费者健康，维护食品企业信誉及市场秩序。

常用检测方法包括传统培养法，将待测样品进行划板或涂布培养，在35 - 37℃等特定温度和环境下培养24 - 48小时，观察菌落并鉴定是否为李斯特菌，但耗时较长。酶联免疫吸附试验通过特异性抗体检测样品中的李斯特菌抗原，灵敏度较高，但存在假阳性或假阴性可能。聚合酶链式反应通过扩增李斯特菌特异性基因片段进行检测，灵敏度和特异性都较高，通常先富集培养样品，提取DNA作为模板进行扩增，再通过电泳或实时荧光检测判断结果。此外，还有基于免疫磁珠、纳米技术、流式细胞仪等新型检测方法，实际检测中需依据样品性质、检测目的及实验条件等选择合适方法 。