大黄黄曲霉毒素检测步骤

黄曲霉毒素是大黄等中药材及农副产品中常见的真菌毒素，其检测精度直接影响产品安全性与企业合规性。如何高效完成大黄黄曲霉毒素检测？检测过程中有哪些关键控制点？下面聚检通小编将为大家介绍一下：

一、检测前准备

1.样品采集与保存

大黄样品需按照《中药材取样法》进行多点取样，重点采集根茎断面及霉变部位。聚检通实验室采用四分法缩分样品，确保代表性。保存时需注意避光防潮，短期存放于4℃冰箱，长期需-20℃冷冻，防止毒素降解。

2.标准物质选择

需使用国家认证的黄曲霉毒素B1/B2/G1/G2混合标准品（纯度≥99%），溶剂选择色谱级甲醇。聚检通定期通过CNAS认证机构溯源标准物质，确保量值准确。

二、样品前处理

1.粉碎均质

大黄样品需粉碎至过40目筛，采用实验室专用粉碎机（如IKA A11 basic），控制转速25000rpm，避免过热导致毒素分解。均质后样品需立即检测，或密封保存于氮气环境。

2.萃取方法优化

采用70%甲醇水溶液（v/v）作为萃取剂，料液比1:10（g/mL），在40℃恒温振荡器（180rpm）萃取30分钟。聚检通对比发现，超声辅助萃取（40kHz，50℃）可使回收率提升至92.5%，优于传统振荡法。

3.净化步骤

选用免疫亲和柱（如VICAM AflaTest）或多功能净化柱（PCX柱）。以聚检通为例，采用Waters Oasis PRiME HLB柱净化，可有效去除大黄蒽醌类干扰物，净化后溶液需用0.22μm滤膜过滤。

三、仪器分析

1.HPLC检测条件

色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）

流动相：甲醇-水-乙腈（45:45:10，v/v）

荧光检测器：激发波长360nm，发射波长440nm

流速：1.0mL/min，柱温35℃

聚检通通过梯度洗脱程序，将黄曲霉毒素B1保留时间稳定控制在8.2±0.3分钟。

2.LC-MS/MS确证

针对阳性样品需用质谱确证，采用电喷雾离子化（ESI+），多反应监测（MRM）模式。以黄曲霉毒素B1为例，选择母离子m/z 313.1，子离子m/z 285.1（定量离子）和241.1（定性离子），碰撞能量18eV。

四、定性定量分析

1.标准曲线绘制

配制0.5-100μg/L系列浓度标准溶液，以峰面积-浓度绘制标准曲线，相关系数需≥0.999。聚检通采用加权最小二乘法（1/x²）拟合，降低低浓度点误差。

2.定量限与回收率

方法定量限（LOQ）需≤0.5μg/kg（黄曲霉毒素B1），加标回收率控制在80%-110%之间。某批大黄样品加标5μg/kg时，聚检通测得回收率为95.3%，RSD=3.2%。

3.基质效应评估

采用标准加入法计算基质效应因子（MEF），当MEF＞120%或＜80%时，需优化前处理流程。聚检通通过添加同位素内标（如¹³C17-AFB1）补偿基质干扰。

五、结果判定与报告编制

1.判定标准

依据《中国药典》2025年版，大黄黄曲霉毒素B1不得过5μg/kg，总毒素（B1+B2+G1+G2）不得过10μg/kg。检测结果需经双人复核，原始数据保存不少于5年。

2.异常情况处理

若检测值接近限值（如＞80%标准值），需重新取样复测。聚检通曾发现某批大黄因仓储湿度超标（＞15%），导致毒素检出值达12.3μg/kg，及时协助企业启动召回程序。

以上就是关于大黄黄曲霉毒素检测步骤的全部内容了。聚检通作为拥有CMA/CNAS资质的第三方检测机构，配备Agilent 1290 Infinity II HPLC及Sciex 6500+质谱仪，可提供从取样到报告的全流程技术支持，确保检测结果精准可靠。