厨房抹布微生物指标检测操作步骤‌‌

厨房抹布作为高频接触食品污染源的物品，其微生物指标直接影响食品安全。本文依据GB 14934-2016《食品安全国家标准 消毒餐（饮）具》及ISO 18593:2018微生物采样标准，详细说明厨房抹布微生物检测操作步骤。

一、样品采集与预处理规范

1. 采样前准备

穿戴无菌手套，使用75%乙醇对剪刀、镊子等工具进行表面消毒。提前开启紫外线灭菌箱，对自封袋、采样棉签等耗材灭菌30分钟。

2. 现场采样操作

在抹布使用后2小时内完成采样。选取抹布中心及四角共5个采样点，每个点位用10cm²规格无菌模板覆盖，蘸取3ml无菌生理盐水的棉签反复刮擦50次，棉签头折断存入10ml洗脱液中。

3. 样品运输要求

采样后立即将样品置于4℃冷藏箱，确保2小时内送达实验室。运输箱内放置温度记录仪，全程温度波动需控制在±1℃范围内。

二、实验室检测方法

1. 菌落总数测定

取1ml洗脱液加入9ml PBS缓冲液进行10倍梯度稀释。选择2个适宜稀释度，分别吸取1ml样液注入无菌平皿，倾注45℃ PCA培养基。待凝固后倒置于36℃培养箱48±2小时，计数30-300CFU区间菌落。

2. 大肠菌群检测

采用MPN法三级发酵。将原液及10⁻¹、10⁻²稀释液各接种3管LST肉汤，44.5℃培养24小时。产气管转种EC肉汤，44.5℃培养48小时后读取阳性管数，查MPN表得定量结果。

3. 致病菌筛查

针对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌分别使用XLD琼脂和Baird-Parker琼脂进行选择性培养。可疑菌落需进行革兰氏染色、氧化酶试验等生化鉴定，必要时采用PCR方法确认毒力基因。

三、检测结果判定标准

1. 菌落总数限值

根据WS/T 508-2016《医院医用织物洗涤消毒技术规范》，清洁抹布菌落总数应≤200CFU/cm²，检出大肠菌群或致病菌直接判定不合格。

2. 致病菌处理规范

若检出沙门氏菌或金黄色葡萄球菌，需立即启动追溯程序：对同批次清洗的抹布全数复检，检查清洗消毒设备参数，排查作业人员手部带菌情况。

四、质量控制关键点

1. 空白对照设置

每批次检测需包含阴性对照（无菌生理盐水）和阳性对照（标准菌株ATCC 25922）。阳性对照回收率应达70-130%，空白组菌落数不得超过1CFU/皿。

2. 环境监测要求

每周对超净工作台进行沉降菌检测，直径90mm平皿暴露30分钟，菌落数需＜1CFU/皿。每月进行人员手部涂抹检测，菌落总数应≤10CFU/cm²。

3. 设备校准管理

培养箱温度每日记录两次，年波动不超过±0.5℃。移液器每季度进行 gravimetric 校准，误差需控制在±1%以内。

五、检测报告编制要点

1. 数据修约规则

菌落总数采用两位有效数字，单位精确到CFU/cm²。MPN值按95%置信区间标注，如3.6MPN/cm²（95%CI 1.1-9.4）。

2. 异常数据处理

对"TNTC"（Too Numerous To Count）样品需备注最高稀释度菌落数，例如：＞1000CFU/cm²（10⁻³稀释度菌落数278）。

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