大黄有效成分含量检测国家标准要求

问：大黄有效成分检测国家标准最新规定有哪些？

答：

一、标准名称

1. GB/T 31773-2015《中药材中总蒽醌的测定 分光光度法》

2. GB/T 36046-2018《大黄药材及饮片中游离蒽醌的测定 高效液相色谱法》

3. 《中国药典》2020年版一部（大黄项）

4. GH/T 1278-2019《药用植物及制剂外经贸行业标准 大黄》

5. YB/T 5055-2020《药用大黄质量分级》

二、标准内容

1. GB/T 31773-2015规定了大黄总蒽醌的检测方法与含量要求。标准要求采用分光光度法，以1,8-二羟基蒽醌为对照品，检测波长510nm。游离蒽醌与结合蒽醌需经水解处理，总蒽醌含量不得低于1.5%（干燥品计）。样品制备需通过甲醇回流提取，水解采用浓盐酸-冰醋酸体系，显色反应使用醋酸镁甲醇溶液。

2. GB/T 36046-2018明确了大黄游离蒽醌的HPLC检测规范。色谱柱选用C18（4.6×250mm，5μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15），检测波长254nm。标准规定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚五种成分的总量不低于0.20%。各成分分离度需＞1.5，理论板数按大黄素峰计应≥5000。

3. 《中国药典》2020年版规定：大黄需检测水分（≤15.0%）、总灰分（≤10.0%）、酸不溶性灰分（≤0.8%）、浸出物（≥25.0%）。有效成分要求总蒽醌（以芦荟大黄素计）≥1.7%，游离蒽醌≥0.35%。检测采用HPLC法，色谱条件与GB/T 36046-2018基本一致，但增加了结合蒽醌的计算公式：结合蒽醌=总蒽醌-游离蒽醌。

4. GH/T 1278-2019对外贸用大黄提出更高要求：水分≤12.0%，总灰分≤8.0%，重金属总量≤20.0mg/kg。有效成分规定总蒽醌≥2.0%，游离蒽醌≥0.50%。特别要求检测农药残留，包括六六六、滴滴涕等9种有机氯农药，总量≤0.2mg/kg。检测需采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）进行确认。

5. YB/T 5055-2020将药用大黄分为三个等级：特级品总蒽醌≥2.5%，一级品≥2.0%，合格品≥1.7%。要求检测粒径均匀度（过4号筛≥95%）、霉变率（≤1%）、杂质含量（≤2%）。新增指纹图谱检测，规定HPLC图谱需与对照图谱匹配度≥90%，确保药材道地性。

三、检测方法

现行标准主要采用分光光度法与高效液相色谱法两类检测技术。分光光度法适用于总蒽醌的快速测定，通过蒽醌类成分与显色剂的特征显色反应实现定量，具有操作简便、设备成本低的优势，但无法区分具体成分。HPLC法则可精确测定各游离蒽醌单体含量，采用反相色谱系统实现五种主要蒽醌成分的基线分离。

HPLC检测需严格控制色谱条件：柱温保持30±1℃，流速1.0mL/min，进样量10μL。系统适应性测试要求相邻色谱峰分离度≥1.5，拖尾因子≤2.0。样品前处理包括甲醇超声提取、离心过滤等步骤，游离蒽醌提取时间需精确控制30分钟。定量采用外标法，标准曲线相关系数r²应≥0.999。

对于结合蒽醌的检测，需进行酸水解处理：取总蒽醌样品加25%盐酸-甲醇（1:4）溶液，85℃水浴回流30分钟。水解后需立即冷却，并用氯仿萃取三次。该处理可将结合型蒽醌苷转化为苷元，通过总蒽醌与游离蒽醌的差值计算结合蒽醌含量。实验需平行测定3次，RSD≤3%方为有效数据。