牙膏微生物检测标准操作流程详解

问：牙膏微生物检测标准操作流程是什么？

答：

一、标准名称

GB/T 29636-2020《牙膏中霉菌和酵母菌的检测》

GB 8372-2018《牙膏》

GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》（适用于牙膏微生物指标参照）

GB/T 7918.1-2021《化妆品微生物标准检验方法 总则》

GB 22115-2008《牙膏用原料规范》

二、标准内容

GB/T 29636-2020《牙膏中霉菌和酵母菌的检测》

该标准规定了牙膏中霉菌和酵母菌的检验程序。明确采用平板计数法，使用孟加拉红培养基，培养温度28℃±1℃，培养时间5d。检测流程包括样品预处理（无菌称取10g样品，加入90mL稀释液均质）、梯度稀释、倾注培养、菌落计数。结果判定要求霉菌和酵母菌总数≤100 CFU/g。检测环境需符合GB 15979中规定的微生物实验室洁净度要求，实验过程需设置阴性对照与阳性对照。

GB 8372-2018《牙膏》

标准第四章"微生物指标"规定：菌落总数≤500 CFU/g，耐热大肠菌群/3g不得检出，铜绿假单胞菌/3g不得检出，金黄色葡萄球菌/3g不得检出。检测方法引用GB 7918系列标准，明确取样量为10g±0.1g，稀释液为含0.1%蛋白胨的生理盐水。致病菌检测需经选择性增菌、分离培养及生化鉴定，确认试验包含氧化酶试验、API 20NE鉴定系统等。

GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》

附录B规定微生物检测通用方法，适用于牙膏微生物检验参照。要求样品处理时需在30℃±1℃温水中振荡30min溶解膏体，采用薄膜过滤法处理油性基质。菌落总数检测使用营养琼脂培养基，37℃培养48h；大肠菌群检测使用乳糖胆盐发酵管，44.5℃培养24h。实验室需配备Ⅱ级生物安全柜，实验人员需通过微生物检测资质考核。

GB/T 7918.1-2021《化妆品微生物标准检验方法 总则》

标准第6章明确微生物实验室应具备单向气流、洁净度等级不低于10万级的环境条件。规定检测设备校准要求：培养箱温度偏差≤±1℃，天平精度0.001g，灭菌锅需每月进行嗜热脂肪芽孢杆菌生物监测。样品保存要求：未开封样品需在25℃以下避光保存，开封后立即检测。检测报告应包含样品信息、检测方法、培养条件、结果单位（CFU/g）及判定结论。

GB 22115-2008《牙膏用原料规范》

标准第5.7条规定原料微生物控制指标：菌落总数≤1000 CFU/g，不得检出沙门氏菌。检测方法依据《中华人民共和国药典》微生物限度检查法，采用薄膜过滤法处理难溶原料。要求原料供应商每批提供微生物检测报告，生产企业每季度进行原料微生物复检。对于植物提取物等高风险原料，需增加霉菌和酵母菌检测项目。

三、检测流程

样品处理

在生物安全柜内称取10.0g±0.1g牙膏样品，加入90mL含0.1%吐温80的蛋白胨生理盐水稀释液，涡旋振荡2min形成1:10稀释液。油性膏体需40℃水浴融化后取样。

梯度稀释

取1mL 1:10稀释液加入9mL稀释液中，制备1:100梯度，重复操作至所需稀释度。每梯度更换无菌吸头，稀释过程控制在15min内完成。

接种培养

菌落总数检测：选择2-3个适宜稀释度，各取1mL注入无菌平皿，倾注冷却至46℃的营养琼脂培养基，旋转混匀。凝固后倒置于37℃培养箱培养48h±2h。

结果计数

培养结束后，选择菌落数在30-300 CFU的平板进行计数。计算公式：菌落总数（CFU/g）=平均菌落数×稀释倍数。计数时排除蔓延菌落，直径<0.5mm的菌落需使用放大镜观察。

致病菌检测

取1:10稀释液10mL接种于SCDLP增菌液，36℃±1℃培养18-24h。增菌液划线接种血琼脂平板，观察溶血现象。疑似菌落进行革兰氏染色、血浆凝固酶试验等确证试验。

结果报告

菌落总数按四舍五入保留两位有效数字，单位表示为CFU/g。致病菌检测结果注明"检出"或"未检出"，检测报告需包含检测依据标准、检测方法、检测条件及判定结论。整个流程需在24h内完成样品处理，检测原始记录保存期限不少于3年。