速冻汤圆检测报告中致病菌检测怎么做？

速冻汤圆致病菌检测是食品安全质量控制的核心环节，直接关系到产品卫生安全及消费者健康。检测需严格遵循国家标准，针对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等常见致病菌进行系统化分析。

一、致病菌检测对象及标准

速冻汤圆致病菌检测主要针对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌等高风险微生物。依据《GB 19295-2011 食品安全国家标准 速冻面米制品》规定，致病菌不得检出。检测方法需符合《GB 4789 系列微生物检验标准》，例如：

沙门氏菌：按GB 4789.4-2016进行增菌、分离及生化鉴定；

金黄色葡萄球菌：依据GB 4789.10-2016，采用Baird-Parker平板计数法；

单核细胞增生李斯特氏菌：参照GB 4789.30-2016完成选择性培养及确认试验。

二、样品制备与预处理

1. 采样规范：按GB 4789.1要求，抽取25g速冻汤圆样品，与225mL无菌缓冲蛋白胨水（BPW）混合均质。

2. 前增菌处理：针对沙门氏菌等需富集的致病菌，将均质液于37℃培养18-24小时，激活受损菌体。

三、传统培养法检测流程

1. 选择性分离：

沙门氏菌：使用亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）和木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂（XLD）进行二次增菌及平板划线；

金黄色葡萄球菌：接种Baird-Parker平板，37℃培养48小时后观察典型菌落（黑色圆形、周围浑浊带）。

2. 生化鉴定：

对可疑菌落进行革兰氏染色、血浆凝固酶试验（金黄色葡萄球菌）或三糖铁琼脂试验（沙门氏菌）；

沙门氏菌需进一步完成血清学凝集试验。

四、快速检测技术应用

为提高效率，可结合分子生物学与免疫学方法：

1. 实时荧光定量PCR（qPCR）：

提取样品DNA后，使用特异性引物扩增致病菌靶基因（如沙门氏菌的invA基因），通过Ct值判定结果；

符合《GB/T 27403-2008 实验室质量控制规范》要求。

2. 酶联免疫吸附法（ELISA）：

利用致病菌表面抗原与标记抗体的特异性结合，通过显色反应定性检测，适用于大规模筛查。

五、结果判定与报告出具

1. 阴性/阳性判定：

传统法：若选择性平板无菌落生长或生化试验不符，判定为阴性；

快速法：qPCR无扩增曲线或ELISA吸光度值低于临界值，判定为阴性。

2. 报告记录：需明确标注检测方法、标准依据及检出限（如“未检出/25g”）。

六、质量控制要点

1. 实验环境：按生物安全二级（BSL-2）要求操作，避免交叉污染；

2. 培养基验证：每批次培养基需进行无菌性检查及阳性菌株生长试验；

3. 人员能力：检测人员需通过CNAS认可的能力验证项目。